HÜCRELERİN DONDURULMASI
 

1) Petri üzerindeki besiyeri aspire edilerek uzaklaştırılır.
2) Hücreler serumdan arındırılmak için PBS ile yıkanır,
3) PBS aspire edilerek uzaklaştırılır. Hücreler inkübatörde tripsinle 5 dakika inkübe edilir.
4) Tripsin, hacminin en az iki katı serumlu besiyeriyle inhibe edilir.
5) Hücreler pipetlenerek tek hücre süspansiyonu haline getirilir ve bir falkon tüpe
aktarılır. Üzerine 2-3 ml daha medyum ilave edilir.
6) Hücre süspansiyonu santrifüjlenir (1000-1500 rpm 5 dakika), süpernatan uzaklaştırılır.
7) Pelet 1 ml besiyerinde sulandırılarak sayılır.
8) Dondurma tüpleri içerisine 1:1 oranında dondurma medyumu ve hücre çözeltisi konur
9) Tüpler dondurma kabına yerleştirilir ve kap - 80 derin dondurucuya konur. 24 saat sonra dondurma tüpleri sıvı nitrojen tankına transfer edilir.


aLinti..