[PySSyCaT]

1) -196 ºC’den alınan kriyovial 37 ºC’lik su banyosunda hızlı bir şekilde eritilir
2) Kriyovialin içindeki hücre süspansiyonu 6 ml besiyeri içeren falkon tüpe yavaşça aktarılır. Hücreler DMSO içerisinde oldukları için maniplasyonlar nazik olmalıdır.
3) Tüp 1800 rpm’de 5 dk santrifüj edildikten sonra üst sıvı atılır ve pelete 1 ml medyum uygulanır.
4) Hücreler 1 ml içinde iyice çözüldükten sonra üzerlerine 4 ml besiyeri eklenir. 5 ml’lik hücre süspansiyonu 60 mm’lik medyumlu’lu kültür kabına aktarılır.
5) Ertesi gün medyum değiştirilir (2. gün). Kültür kabı her gün invert mikroskop ile kontrol edilip hücreler konfluent oldukları gün tripsinlenerek pasajlanabilir.

Kullanılan çözeltiler

1) Hücre Kültür Medyumu: DMEM/F12 %10 FBS ve %1 Antibiyotik (250 ml için; 225 ml DMEM/F12, 25 ml FCS ve 250 μl antibiyotik)
2) dPBS: Ticari solusyon
3) Tripsin /EDTA % 0,25 : Ticari Solüsyon
4) Dondurma Medyumu : % 80 FCS ve %20 DMSO

KULLANILAN MALZEMELER

Kimyasallar:
1. DMEM/F12 (SİGMA D0547 1 LX10)
2. DPBS (SİGMA D5652 1 LX10)
3. %0,25 TRİPSİN-EDTA (SİGMA T4049)
4. DMSO (SİGMA D 2650 ve D 4540 )
5. ANTİBİYOTİK (SİGMA A 5955)
6. FCS (SİGMA F9665 veya BİOLOGİCAL INDUSTRIES HEAT INACTİVATED)

Kültür malzemeler:

1. DONDURMA KABI MR. FROSTY (NALGENE 5100-0001)
2. DONDURMA TÜPLERİ CYROVİALLER (NUNC 377267 1,8 ml)
3. PİPET UÇLARI ( 5 ML 160510, COSTAR 10 ML 4488, 50 ML LİK PLASTİK PİPET UCU)
4. KÜLTÜR PETRİLERİ ( TPP 35 mm-93040, TPP 60 mm-93060, TPP 100 mm)
5. CAM PASTÖR PİPETİ (ISOLAB)
6. PASTÖR PİPETLER İÇİN OTOKLAVA DAYANIKLI METAL KUTU
7. KÜLTÜR TÜPLERİ (TPP 15 ML VE 50 ML-90050)




aLinti..